Caracterización funcional de las mutantes (y817c, s460c, t405c, r456c) del intercambiador aniónico ae4 (slc4a9)

Plan de Estudios de Ingeniería Biotecnológica

Se sabe que la célula lleva a cabo procesos para mantener estables sus actividades metabólicas en procesos importantes para mantenimiento celular, una de las actividades importantes es el intercambio de iones a través de la membrana plasmática de las células. Este intercambio se da partir de unas proteínas localizadas en la membrana que reconocen sustancias específicas permitiendo la entrada y salida de estas. El intercambiador ae4 funciona como transportador de membrana Cl-/HCO3- dependiente de Na+, se le atribuye gran aporte en el proceso de regulación de phi y está asociado a enfermedades como la acidosis tumoral renal, que se describió que se debe a un cambio especifico en su secuencia de aminoácidos, también reportaron que se expresa en la glándulas salivales de ratón donde tiene una función importante de secreción y absorción de saliva. Se desconoce la estructura de este intercambiador por lo que se realizó un modelo 3D por homología del cotransportador NCBe1 y a partir de este modelo se realizaron las mutaciones, donde se observa que su funcionamiento se ve alterado en gran manera. Las mutantes fueron evaluadas funcionalmente a través de la medición del phi, se realizó con la incubación de la sonda BCECF-AM (2',7'-bis-(2-carboxietil)-5-(-6)-carboxifluoresceína en la forma acetoxi-metil éster) que internaliza en la célula y la razón de fluorescencia 490/440 se grafica en función del tiempo y la actividad de intercambio Cl-/HCO3- se obtiene del componente lineal del cambio de pH, al cual se le ajusta una función recta.